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病原學檢查 (補充件)

A1　標本的收集

        標本以病人糞便為主，水樣便采取1～3mL，成形便采取指甲大小的糞量，亦可用直腸棉拭或采便管由肛門插入直腸內3～5cm處采取。

A2　標本的送檢

        采得的標本應立即接種于培養基。不能立即檢查的，要放入堿性蛋白胨水或文臘二氏保存液或插入Cary-Blair二氏半固體保存培養基中。標本與保存液比例約為1∶5。

A3　分離培養

A3.1　直接分離培養：急性期病人水樣大便標本在增菌培養的同時可取其粘液絮片或用棉拭子直接接種在選擇性培養基上。目前常用的強選擇性培養基有慶大霉素瓊脂、4號瓊脂和TCBS瓊脂等。

A3.2　增菌后分離培養：所有糞便標本都應接種堿性蛋白胨水培養基，放37℃增菌6～8h后，從菌膜下表層取一接種環培養物，劃線接種于強選擇性瓊脂平皿。

A3.3　鑒定：自分離培養基上挑取可疑菌落與01群霍亂弧菌多價診斷血清及0139群霍亂弧菌診斷血清做玻片凝集試驗。玻片凝集用血清的效價一般應為1∶40～1∶50。如可疑菌落在血清中很快(一般在10s內)出現肉眼可見的明顯凝集，在生理鹽水中不凝集者判為陽性。可疑菌落較多時，應挑選5個以上的菌落逐個進行玻片凝集檢查，必要時，取原劃線菌落邊緣透明部分再做玻片凝集，均為陰性時方可報告未檢出01群及0139群霍亂弧菌。對首發病例菌株需送上一級實驗室做進一步鑒定或復查。